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新しいコロナウイルス （2019-nCoV）の核酸の診断キット

（PCR蛍光性のProbing）

 

意図されていた使用

 

小説のコロナウイルス （2019-nCoV）の核酸の診断キット（PCR蛍光性のProbing）は新しいコロナウイルス （2019-nCoV）のORF1abおよびNの遺伝子の質的な検出のために新しいコロナウイルスの伝染を用いる疑われた肺炎の場合からのnasopharyngeal綿棒で、oropharyngeal綿棒、歯槽の洗浄液体、痰、血清、全血および糞便、新しいコロナウイルスの伝染の疑われた集りを持つ患者、および新しいコロナウイルスの伝染の差動診断を要求している他の患者使用される。

 

生体外の診断使用だけのため。専門の使用だけのため。

 

 

概要

 

「疑われた場合」の定義は「患者の集りが」中国CDC （currentversion）ことをによって出されたコロナウイルスの新しい伝染のための「コロナウイルスの新しい伝染のための肺炎診断および処置プログラム」のおよび「肺炎場合監視プログラムを」の示すことによって定義されることを疑い。

 

（2019-nCoV）新しいコロナウイルス核酸の診断キット（PCR蛍光性のProbing）が生体外の診断のための関連の言い分の補助診断そしてDecember2019以来のコロナウイルス新しい（2019-nCoV）の伝染の肺炎の発生の間に緊急の予備のためにだけ使用される、このキット臨床練習で定期的な生体外の診断として使用されるべきではない。

 

「コロナウイルスの新しい伝染のための肺炎診断そして処置プログラム」のの関連した条件、「コロナウイルスの新しい伝染のための肺炎防止および制御プログラム」のおよび使用中の他の文書に続きなさい。

 

新しいコロナウイルスの核酸テストは「中国CDCの新しいコロナウイルスの実験室試験のための技術的な指針に」従い、よいbiosafetyを保つべきである。

 

 

テスト主義

 

蛍光性量的なPCRの器械の実時間蛍光性量的なRT-PCRの技術の適用によって、このテストは二重ターゲット遺伝子の節約された順序のために設計されているターゲット地域として新しいコロナウイルス （2019-nCoV） ORF1abおよび蛍光信号の変更を通してサンプルRNAの検出を達成するためにnucleocapsid蛋白質Nの遺伝子のコーディングの特定の節約された順序を、利用する。

 

偽の否定的な結果を避けるPCRの検出システムの使用内部制御信号は正常であるかどうかの検出によってテスト標本のPCRの抑制剤の存在を監察する肯定的な内部制御。

 

診断キットの部品

 

このキットは拡大の反作用の試薬で、次の部品を含んでいる:

 

いいえ。	試薬の名前	Spec.及びQty		主要な原料
		24のT	48のT
1	2019 nCov PCR組合せ	624µL/tube X 1	1248µL/tube X 1	首相（4.62%）、調査（1.15%）、dNTPs （3.85%）、MgCl2 （0.77%）、Rnasin （0.48%）、 PCRの緩衝（89.13%）
2	2019 nCov PCR酵素の組合せ	96µL/tube X 1	192µL/tube X 1	RTの酵素（62.5%）、 Taqの酵素（37.5%）
3	2019 nCov PCR肯定的な制御	500µL/tube X 1	500µL/tube X 1	ターゲット遺伝子（ORF1 ab、Nの遺伝子）および内部標準的な遺伝子の片（P） Rnaseを含んでいる生体外のTranscriptional RNA
4	2019 nCov PCR否定的な制御	500µL/tube X 1	500µL/tube X 1	正常な塩

 

 

標本の条件

1. 適当な標本のタイプ:nasopharyngeal綿棒、oropharyngeal綿棒、歯槽の洗浄液体、痰、血清、全血および糞便。

 

2. 標本のコレクション

Nasopharyngeal綿棒/oropharyngeal綿棒:「コロナウイルスの新しい伝染のための肺炎防止そして制御計画」のから「コロナウイルスの新しい伝染のための肺炎実験室技術的なガイド」のの"標本コレクション方法」のの関連した準備に従ってサンプルを集めなさい。綿棒がナイロン試しの頭部の作り、ABSがサンプル コレクションに見本抽出の棒選ぶことができることが証明される。

 

Nasopharyngeal綿棒:標本コレクションの管はバーコードとnasopharyngeal綿棒できる限り集められたwithin3病気の手始めの後のべきである幾日最初に貼られるべきである。指を搭載する頂点のnasi間の長さをおよび耳たぶ、そして印測定するのに綿棒を使用しなさい。鼻（表面）に垂直の方向の鼻腔に綿棒を挿入しなさい。綿棒は耳たぶからの頂点のnasiに長さの少なくとも半分挿入されるべきである。鼻for15 | 30 s、穏やかにの綿棒停止をrotate3しなさい| 5回は標本コレクションの管cotaining2 mlの換散の緩衝（サンプル解放の試薬の換散の緩衝と同じように）に、すぐに綿棒を入れたりまたはRNAの酵素阻害剤を含んでいる貯蔵の試薬を見本抽出する。綿棒を挿入しなさい、次に上の近くで生殖不能の綿棒の棒を、シーリング フィルムが付いている管の帽子そしてシールをきつく締めるために壊しなさい。

 

Oropharyngeal綿棒:標本コレクションの管は病気の手始めの後の3日以内にバーコードとoropharyngeal綿棒できる限り集められるべきである最初に貼られるべきである。生殖不能の群がる綿棒は見本抽出に適度に拭く後部のpharyngeal壁を、舌に触れることを避ける使用するべきである。すぐに場所oropharyngeal綿棒のコレクションに使用するコレクションの管への生殖不能の綿棒。生殖不能の綿棒の棒を上の近くで壊しなさい、シーリング フィルムが付いている管の帽子そしてシールをきつく締めなさい。

 

歯槽の洗浄液体:肺炎の厳しい患者か患者急速の進歩。無菌操作によってサンプル バーコードおよびねじ帽子によって分類される50ml無菌容器への臨床医extract≥5ml BALF。標本を集め、そしてシーリング フィルムが付いている管の帽子そしてシールをきつく締めなさい。

 

痰:

標本コレクションの管はバーコードと最初に貼られるべきである。痰を集めた場合標本を集めるために航空路を開けてはいけない。ねじ帽子、負荷が付いている使い捨て可能な無菌試しのコップへのCollect.deepの咳の痰2つのmLのプロテアーゼK （1g/L）コップの見本抽出に。痰を集め、そしてシーリング フィルムが付いている管の帽子そしてシールをきつく締めなさい。30分内の検出にできる限り送りなさい。標本が長い間隔に運ばれる必要があればプロテアーゼKは最初に加えられるべきではない。

 

全血:

血液サンプルはviremiaと考慮される手始めの後の7日以内にか重大な患者、または患者集めることができる。標本コレクションの管はバーコードと最初に貼られるべきである。エチレンジアミン四酢酸の抗凝固薬を含んでいる真空の血のコレクションの管に血液サンプルの2~4mlを集めなさい。

 

糞便:

病気の初期の下痢のような胃腸徴候の患者のため、ジャム3~5g （大豆のサイズ）の糞便。標本コレクションの管はバーコードと最初に貼られるべきである。条件が割り当てるときシーリング フィルムが付いている2ml正常な塩の（RNAの酵素阻害剤は加えることができる）そしてシールを含んでいるねじ帽子が付いている標本コレクションの管にサンプルを集めなさい。

 

サンプル コレクションの後で、保存のためのサンプル貯蔵の試薬に置くことを推薦する。

 

保存の解決が、正常な塩のような、TEの緩衝、またサンプル保存のためにサンプル貯蔵の試薬として2-4Mの含んでいるグアニジン（グアニジンの塩酸塩のような）使用することができることが証明された。グアニジンを含んでいるサンプル貯蔵の試薬は核酸の抽出のためのSansure Biotech Inc.が製造した解放の試薬を見本抽出するために直接合わせることができない。必要ならば、核酸（DNA/RNA）の抽出か浄化のキット（磁気ビード方法） （照合番号を使用することを推薦する:S1002E）核酸の抽出のためのQIAGENによって製造されたSansure Biotech Inc.かQIAampのウイルスのRNAの小型キット（50）が製造した。

 

3. 標本の貯蔵そして配達:

テストされるべき標本は4℃で24時間以内にテストされるべき標本貯えることができるすぐに処理することができる。24時間以内に検出することができない標本は-70℃でまたはそれ以下に貯えられるべきである（-70℃の貯蔵条件がない時、テストされるべき標本は15日間-20±5℃で10日間-20℃で核酸貯えることができる貯えることができる）。多数の氷結/雪解け周期は避けるべきである。標本は氷が付いている密封された凍結する水差しまたは氷が付いている密封された泡箱で運ばれるべきである。30minのための56℃のサンプルの不活性化はこのキットの検出に影響を与えない。

 

 

結果の分析（設定を調節するために器械の利用者マニュアルを参照しなさい。）

 

結果は反作用が完了する場合自動的に救われる。検出および内部制御のターゲットの拡大のカーブを分析しなさい。分析の結果に従ってグラフのベースラインの開始、終わりおよび境界価値を調節しなさい（ユーザーは実際の状態に従って価値を調節できる。開始の価値は3-15、と5-20の間で終わりの価値の間で置くことができる。平たい箱であるために否定的な制御のまたは境界の下の拡大のカーブを調節しなさい）。」分析するために分析を実行するために「かちりと鳴らしなさい「品質管理で」与えられる条件を満たすために各変数を確かめなさい。質的な結果を記録することを「版」の窓に行きなさい。

 

品質管理

 

項目	2019 nCoV PCR否定的な制御	2019 nCoV PCR肯定的な制御
Ctの価値	Ct無しかCt >チャネルFAM、ROXおよびジンクスの40 （内部制御）	チャネルFAM、ROXおよびジンクスの≤ 35 （内部制御）

 

 

 

 

 

試験結果は有効として前述のすべての条件が同じテストのために満たされれば扱われる。さもなければ試験結果は無効ように扱われ、再試験をされる必要がある。

 

検出の結果の説明

 

結論	拡大の結果
2019-nCoV陽性	FAMやROXチャネルで検出される典型的なS形の拡大のカーブおよび六角形のチャネルで検出される拡大のカーブ、Ct≤40がある。
2019-nCoV陰性	典型的なS形の拡大のカーブ（Ct無し）またはCt > FAMおよびROXチャネルで検出される40および六角形のチャネルで検出される拡大のカーブ、Ctの≤ 40がない。

 

FAMで、ROXおよび六角形のチャネル（Ct無し）、またはCt検出される典型的なS形の拡大のカーブが> 40ない。標本の集中が余りに低い、または反作用を禁じる干渉物質があることが示される。試験結果は無効である。調査は調べ、理由を除くために行われるべきで、標本を再度集め、そして標本を再試験をする。

 

注:ウイルス文化のために、内部制御の試験結果のための条件がない。

 

 

貯蔵および安定性

 

1. 診断キットは密封された袋で20±5°Cの貯えられ、ライトから保護されるべきである。キットは6か月間暫定的に有効である。

2. 製造年月日および外のパッケージの満期日を参照しなさい。

3. 試薬は使用されなくて満期日の内に有効、安定した保つ。試薬の容器が開く限り、氷結/雪解け周期は3を超過するべきではない。

 

多用性がある器械

 

診断キットはSLAN-96P、ABI7500の生命技術QuantStudio ^TM5、RocheCobas480のMA-6000PCRの器械に適当である。